影响ASD光谱仪读数不稳定的因素是什么

　　ASD光谱仪是指通过测定物质的波长在光区范围内光的吸收度，对物质进行定性和定量分析的仪器。由光源、单色器、样品池、检测器和记录仪组成。光谱主要来源于分子振动，由于每种物质的结构不同，就会出现不同的吸收频率，因此产生具有一定特征的光谱，由此可以进行定性、定量分析和结构剖析。由于光区的不同，光谱法分为近光谱、中光谱和远光谱，其中分子振动的基频主要位于中区。因此中区在定性与定量分析方面准确性更高。
 

　　根据信号的采集方式光谱可分为透射光谱、反射光谱和光声光谱，这些光谱都是吸收光谱，但具有不同的特点，如透射光谱多用于定性分析，很难用于定量分析，而反射光谱和光声光谱均可以用于定性和定量分析。光谱法具有快速、样品需要量少、测定方便和不破坏样品等特点，因而在土壤学研究中具有广泛应用，如土壤有机质和矿物的结构与组成。
 

　　ASD光谱仪读数不稳定可能是实验者头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即ASD光谱仪有一定的准确度和精确度。
 

　　1、核酸本身物化性质：溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等在测试时，离子浓度太高也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液(如TE)可大大稳定读数。核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精确的检测结果。水的pH值不稳定，可能导致检测误差。一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收，为了确保准确测量，请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。
 

　　2、样品的稀释浓度：样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了较大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。
 

　　3、ASD光谱仪操作因素：如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值;混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的较小体积等多个操作事项。